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  技術(shù)文章  
 

小鼠免疫球蛋白G(IgG)elisa試劑盒居然可以這么用


發(fā)布日期:[2017/7/28 10:21:45] 共閱[11978]次
 小鼠免疫球蛋白G(IgG)elisa試劑盒簡介
免疫球蛋白G是血清中免疫球蛋白主成分,約占血清中免疫球蛋白總含量的75%,正常值為9.5~12.5mg/ml。其中40~50%分布于血清中,其余分布在組織中。分子量約為150000道爾頓。人類血清中的IgG主要為單體,正常人的IgG包括四個亞型,其IgG1占60~70%,IgG2占15~20%,IgG3占5~10%,IgG4占1~7%。這些亞型在補體激活的經(jīng)典途中結(jié)合能力各不相同。IgG主要由脾臟和淋巴結(jié)中的漿細胞合成,是能通過胎盤的抗體,對防止新生兒出生數(shù)周內(nèi)的感染起很大作用。嬰兒初生后第3個月已能合成IgG,2~3歲時已達成人水平。40歲后逐漸下降。IgG的含量個體差異很大,同一個體在不同條件下,波動也很大。機體在抗原刺激下產(chǎn)生的大多數(shù)抗菌、抗病毒、抗毒素抗體屬于IgG。不少自身抗體,例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡的LE因子,抗甲狀腺球蛋白抗體也屬于IgG。IgG是機體抗感染免疫的主力抗體。
小鼠免疫球蛋白G(IgG)elisa試劑盒操作方法簡介
實驗開始前,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制),37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。
購買我司elisa試劑盒可以提供免費代測服務(wù),客戶準備好樣本,億迅和南京地區(qū)的客戶可以提供免費上門取樣服務(wù)。其他地區(qū)的客戶,樣本用泡沫箱子包好,放干冰或者冰袋寄送給我們。代測時間為5到7個工作日提供原始數(shù)據(jù),分析數(shù)據(jù), 實驗操作步驟以及實驗所用儀器。
 
 
28.小鼠免疫球蛋白M(IgM)elisa試劑盒居然可以這么用
小鼠免疫球蛋白M(IgM)elisa試劑盒基本信息
IgM占血清免疫球蛋白總量的6%,主要存在血管內(nèi),是機體受抗原刺激后*先產(chǎn)生的抗體,起“先鋒免疫”作用,具有很強的細胞毒活性和細胞溶解活性,由于IgM主要存在在血管內(nèi),是抗血管內(nèi)感染的線抗體,對防止敗血癥的發(fā)生有重要作用。
IgM是存在于大多數(shù)廣物血清中的第二高濃俊的免疫球蛋白.它是19S分子,分子*為190,000道爾頓,由五個7S亞單位所組成,它的每一個亞單在結(jié)構(gòu)上與基本的Y字形免疫球蛋白分子相似,所不同的是它們有四個CⅡ門源單位。而不是三個,以及它們有著μ抗原決定簇。IgM單體被雙硫鍵環(huán)形地連接成星狀,并由一個小形的富含半胱氨酸的多肽叫作J鏈(15,000道爾頓)的,把兩個這樣的單位連起來。IgM分子從漿細胞分泌出來就是——個完整的整體,所以應(yīng)該認為J鏈是這個分子不可缺少的——部分。
IgM是一級免疫應(yīng)答中所產(chǎn)生的主要免皮球蛋白,它也產(chǎn)生于二級免疫應(yīng)答,但往往被二級應(yīng)答中大量生成的IgG所掩蓋,盡竹生成的數(shù)量較少,但IgM在激活補體、調(diào)理作用、中和病毒和凝集作用等方面,比IgG要有效得多(在克分子基礎(chǔ)上)。因為它們的形體很大,所以IgM分子主要是被限制么血管系統(tǒng),因此,它對組織液或分泌物所提供的保護作用意義不大。IgM單體(7SIgM)還在B細胞上起一種抗原受體的作用。
小鼠免疫球蛋白M(IgM)elisa試劑盒操作方法簡介
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1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔?瞻卓准訕悠废♂屢100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制),37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。
購買我司elisa試劑盒可以提供免費代測服務(wù),客戶準備好樣本,億迅和南京地區(qū)的客戶可以提供免費上門取樣服務(wù)。其他地區(qū)的客戶,樣本用泡沫箱子包好,放干冰或者冰袋寄送給我們。代測時間為5到7個工作日提供原始數(shù)據(jù),分析數(shù)據(jù), 實驗操作步驟以及實驗所用儀器。
 

原創(chuàng)作者:南京億迅生物科技有限公司

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