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免疫組化結(jié)果陰性的原因分析

1. 抗體濃度和質(zhì)量問題以及抗體來源選擇錯(cuò)誤；

2. 抗原修復(fù)不全，換修復(fù)液或加強(qiáng)修復(fù)；

3. 組織切片本身這種抗原含量低，設(shè)陽性對(duì)照片；

4. 血清封閉時(shí)間過長；DAB 孵育時(shí)間過短；

6. 細(xì)胞通透不全，抗體未能充分進(jìn)入胞內(nèi)參與反應(yīng)。

非特異性染色的原因（著色一片黃/背景深）

1. 抗體孵育時(shí)間過長，抗體濃度；

2. 多抗易出現(xiàn)非特異性，可選擇單抗；

3. 內(nèi)源性過氧化物酶和生物素滅活不夠；

4. 非特異性組分與抗體結(jié)合，延長血清封閉時(shí)間；

5. DAB 孵育時(shí)間過長或濃度過高；

6. PBS 沖洗不充分，殘留抗體結(jié)果增強(qiáng)著色；

7. 標(biāo)本染色過程中經(jīng)常出現(xiàn)干片；

8. 脫蠟不充分；

9. 二抗與標(biāo)本的內(nèi)源性組織蛋白有交叉反應(yīng)。

染色弱陽性

1. 固定方式不當(dāng)或固定時(shí)溫度過高，影響到抗原的數(shù)量和質(zhì)量；

2. 不適當(dāng)?shù)目乖�修�?fù)方式，抗原決定簇暴露不足；

3. 抗體的稀釋度是否過高或者孵育的溫度/時(shí)間不足；

4. 孵育抗體切片上遺留了過多的沖洗液；

5. 孵育時(shí)切片未放置水平，導(dǎo)致抗體孵育不均勻。

信號(hào)定位與預(yù)測不符的原因

1. 組織固定不及時(shí)，抗原擴(kuò)散移位；

2. 抗體選擇錯(cuò)誤；

3. 膜蛋白核質(zhì)染色：抗原修復(fù)過長，導(dǎo)致細(xì)胞膜破壞，膜蛋白轉(zhuǎn)移。