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熟記抗體保存三大知識點(diǎn),再也不怕抗體失效!


發(fā)布日期:[2024/7/9 17:26:20] 共閱[18]次

一、保存溫度   

對于我們的大部分抗體而言,分裝為小等份在 -20 ℃ 或 -80 ℃ 下凍存是很好保存條件。此外,在收到抗體后,也可暫時(shí)保存至4℃冰箱中,短期保存時(shí)間為1-2周。也有一小部分抗體適合保存于4℃冰箱。

分裝應(yīng)先離心沉降掛在管壁和管蓋上的抗體,分裝量取決于您的實(shí)驗(yàn)常用量,但建議不能少于10μl,以避免蒸發(fā)等造成抗體損失。分裝后的抗體試劑應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融,可短時(shí)間(1-2周)保存于4℃冰箱中。

反復(fù)凍融可能使抗體變性,導(dǎo)致抗體形成聚集體,從而降低其結(jié)合能力。對大部分抗體而言,在-20 ℃下保存就已足夠;在-80 ℃下保存并無明顯優(yōu)勢。保存抗體要避免使用無霜冰箱,因?yàn)閮鋈谘h(huán)(用于減少霜的形成)會造成抗體反復(fù)凍融而失活。

部分抗體試劑中會加入終濃度40%-50%的甘油使其在-20℃下保持溶液狀態(tài),從而降低凍融損傷。此類抗體產(chǎn)品請勿儲存于-80℃冰箱中,否則仍會凝固。值得注意的是,抗體在加入甘油后容易被細(xì)菌污染,操作時(shí)應(yīng)小心,確保無菌。

 

二、防止降解   

 

抗體試劑稀釋至工作濃度后,建議及時(shí)使用,不建議對稀釋后的抗體進(jìn)行長時(shí)間保存。如果必須保存,建議保存于4℃并于一周以內(nèi)使用。一般而言,蛋白質(zhì)濃度高于1mg/ml時(shí)更不容易降解,因此部分抗體試劑中加入了牛血清白蛋白(BSA)作為蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑來防止降解。加入的蛋白質(zhì)還能盡可能減少抗體結(jié)合到容器壁上造成的損失。

需要注意的是,請勿向?qū)⒁M(jìn)行偶聯(lián)的抗體中加入蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑,因?yàn)榈鞍踪|(zhì)穩(wěn)定劑會與抗體競爭,降低偶聯(lián)效率。

 

三、防止污染
 
  

為了防止微生物污染,可將疊氮化鈉作為抗菌劑加入抗體工作液中,保持終濃度為 0.02% (w/v)?贵w中都添加疊氮化鈉,濃度范圍為 0.02%-0.05%?贵w數(shù)據(jù)表的保存緩沖液部分對此有說明。

此外,如果要對活細(xì)胞進(jìn)行染色或處理,或進(jìn)行體內(nèi)研究時(shí),請務(wù)必使用不含疊氮化鈉的試劑?咕鷦⿻钄嗉(xì)胞色素電子傳遞系統(tǒng),對大部分生物體都有毒害作用。

高濃度的疊氮化鈉會干擾涉及胺基的所有偶聯(lián)反應(yīng),因此必須在進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)之將其去除。或可選用0.01%硫柳汞鈉(硫柳汞),這種抗菌劑不含伯胺。

抗體溶液中的疊氮化鈉可通過透析或凝膠過濾去除。IgG 的分子量為 150,000 Da(IgM 約為 600,000 Da),疊氮化鈉的分子量為 65 Da。截留分子量為 14,000 Da 的微透析裝置可去除疊氮化鈉。

透析過程在燒杯中(置于磁力攪拌器上,溫度保持 4 ℃)進(jìn)行,每毫升抗體使用至少 1 升預(yù)冷的 PBS,攪拌透析裝置 6 小時(shí)。更換 PBS 兩次,每次更換后均攪拌至少 6 小時(shí)。如有可能,所有材料都應(yīng)滅菌,并且應(yīng)在無菌條件下處理所得制備物。

原創(chuàng)作者:南京億迅生物科技有限公司

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