為了防止微生物污染,可將疊氮化鈉作為抗菌劑加入抗體工作液中,保持終濃度為 0.02% (w/v)?贵w中都添加疊氮化鈉,濃度范圍為 0.02%-0.05%?贵w數(shù)據(jù)表的保存緩沖液部分對此有說明。
此外,如果要對活細(xì)胞進(jìn)行染色或處理,或進(jìn)行體內(nèi)研究時(shí),請務(wù)必使用不含疊氮化鈉的試劑?咕鷦⿻钄嗉(xì)胞色素電子傳遞系統(tǒng),對大部分生物體都有毒害作用。
高濃度的疊氮化鈉會干擾涉及胺基的所有偶聯(lián)反應(yīng),因此必須在進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)之將其去除。或可選用0.01%硫柳汞鈉(硫柳汞),這種抗菌劑不含伯胺。
抗體溶液中的疊氮化鈉可通過透析或凝膠過濾去除。IgG 的分子量為 150,000 Da(IgM 約為 600,000 Da),疊氮化鈉的分子量為 65 Da。截留分子量為 14,000 Da 的微透析裝置可去除疊氮化鈉。
透析過程在燒杯中(置于磁力攪拌器上,溫度保持 4 ℃)進(jìn)行,每毫升抗體使用至少 1 升預(yù)冷的 PBS,攪拌透析裝置 6 小時(shí)。更換 PBS 兩次,每次更換后均攪拌至少 6 小時(shí)。如有可能,所有材料都應(yīng)滅菌,并且應(yīng)在無菌條件下處理所得制備物。