液體樣本甘油含量檢測(cè)試劑盒：在ATP存在下甘油被甘油激酶磷酸化為3-磷酸甘油，再被甘油磷酸氧化酶氧化產(chǎn)生過氧化氫；在過氧化物酶作用下生色底物轉(zhuǎn)化為苯醌亞胺，其光密度值與甘油濃度成正比。
甘油濃度測(cè)定：
參見下表進(jìn)行加樣。為使反應(yīng)時(shí)間盡量一致，減小實(shí)驗(yàn)誤差，可先加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣品，然后再加入工作溶液。（注意：當(dāng)甘油濃度較低時(shí)，可將待測(cè)樣品與工作溶液按照100µl:100µl體積混合，然后再進(jìn)行測(cè)定，但是如果樣品體積超過100µl時(shí)將會(huì)稀釋工作液中酶濃度，使反應(yīng)靈敏度下降。如果待測(cè)樣品濃度超過線性范圍，可進(jìn)行適當(dāng)稀釋，然后根據(jù)稀釋倍數(shù)來計(jì)算樣品中甘油濃度。）
37ºC或25ºC反應(yīng) 10分鐘。反應(yīng)平衡后顏色在60分鐘內(nèi)穩(wěn)定。
先用蒸餾水+工作液空白管調(diào)零，然后測(cè)定各管OD值。
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算甘油濃度。
附Excel作圖步驟：各標(biāo)準(zhǔn)管OD值為y軸，標(biāo)準(zhǔn)品濃度為x軸。(1)鼠標(biāo)左鍵圈住數(shù)據(jù)，點(diǎn)擊做圖向?qū)Вx擇-散點(diǎn)圖-，點(diǎn)擊-完成-。(2)鼠標(biāo)右鍵點(diǎn)圖上某一點(diǎn)，點(diǎn)擊-添加趨勢(shì)線-，點(diǎn)擊-選項(xiàng)-，點(diǎn)擊-顯示公式-和-R2值-。
說明：
1、維生素C>0.18g/L、血紅蛋白>2g/L、膽紅素>0.25g/L、二硫蘇糖醇、巰基乙醇、高濃度EDTA干擾測(cè)試。
2、正常血清甘油濃度為20-130µmol/L，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)須用不含酚紅無色無血清培養(yǎng)基，如果培養(yǎng)基中含有酚紅，可以選擇含有酚紅無細(xì)胞培養(yǎng)基作為對(duì)照進(jìn)行測(cè)定
強(qiáng)堿條件下甘油和二價(jià)銅絡(luò)合物顯絳藍(lán)色，所以利用甘油這個(gè)特性就可以輕松搞定。主要試劑是AR甘油、氫氧化鈉、硫酸銅。向氫氧化鈉堿化甘油溶液里加硫酸銅，一定要保證甘油被完全絡(luò)合，并且保證多余二價(jià)銅都以氫氧化銅沉淀形式存在，但是氫氧化鈉也不要加太多。甘油銅可見區(qū)大吸收波長是在630nm。先作個(gè)標(biāo)準(zhǔn)系列，繪出吸光度-濃度曲線，然后把待測(cè)試樣吸光度測(cè)出來在標(biāo)準(zhǔn)曲線上一算，濃度就得到了。
液體樣本甘油含量檢測(cè)試劑盒
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