雙鏈DNA中和緩沖液：DNA 中和緩沖液Ⅱ用于將DNA 堿性轉(zhuǎn)移至尼龍膜上,由0.5M Tris-HCl (pH7.2)、氯化鈉等組成,不含蔗糖,可用于核酸雜交,尤其適用于Southern blot 將DNA 轉(zhuǎn)移至尼龍膜實驗。本試劑僅用于科研域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
操作步驟(僅供參考):
1、 按實驗具體要求操作。
2、或按如下步驟將凝膠置于變性溶液(堿性)中進行DNA 變性:
①轉(zhuǎn)移到不帶電荷膜上:a 、將凝膠置于10倍凝膠體積雙鏈DNA 變性緩沖液中,室溫放置45min ,并不斷輕輕振蕩。b 、用去離子水短暫浸泡凝膠,然后將凝膠浸沒于10倍凝膠體積DNA 中和緩沖液Ⅰ中,室溫放置30min ,并輕輕振蕩;更換一次DNA 中和緩沖液Ⅰ繼續(xù)浸泡15min 。
②轉(zhuǎn)移到帶電荷尼龍膜上:a 、將凝膠置于5-10倍凝膠體積DNA 中和緩沖液Ⅱ中,室溫放置15min ,并不斷輕輕振蕩。b 、更換一次DNA 中和緩沖液Ⅱ繼續(xù)浸泡20min ,并不斷輕輕振蕩。
緩沖溶液作用原理和pH值
當往某些溶液中加入一定量酸和堿時，有阻礙溶液pH變化作用，稱為緩沖作用，這樣溶液叫做緩沖溶液。弱酸及其鹽混合溶液（如HAc與NaAc），弱堿及其鹽混合溶液（如NH3•H2O與NH4Cl）等都是緩沖溶液。
由弱酸HA及其鹽NaA所組成緩沖溶液對酸緩沖作用，是由于溶液中存在足夠量堿A-緣故。當向這種溶液中加入一定量強酸時，H+離子基本上被A-離子消耗：
所以溶液pH值幾乎不變；當加入一定量強堿時，溶液中存在弱酸HA消耗OH-離子而阻礙pH變化。
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