：鐵是人體必需元素，對人體新陳代謝和身體健康具有重要作用，血液中鐵含量不足，就會造成缺鐵性貧血。鐵存在于人體所有細胞內(nèi)，各組織、器官包括各內(nèi)分泌 腺都含有鐵。肝臟、脾臟和肺組織內(nèi)含量較為豐富。成人體內(nèi)含鐵 3～5 克，大部分都以蛋 白質(zhì)復(fù)合物形式存在，少部分以離子形態(tài)存在。
并與亞鐵嗪生成紫紅色化合物，在 540-580nm 處可比色測定。
操作步驟：
1. 樣品準備（以 24 孔板為例）：
將含鐵元素 DMEM 培養(yǎng)過細胞用冷 PBS 2ml 洗兩遍，將 PBS 吸棄（若不馬上檢測可將 其凍存于-20℃）。200ul/孔裂解液裂解細胞，置于搖床裂解 2h。
2. 標準品稀釋：用試劑盒提供稀釋用液將 3mM 標準品母液稀釋為：300 uM、150uM、
75uM、37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀釋并設(shè)置 0 濃度對照反應(yīng)管。
3. 將緩沖液與 4.5%高錳酸鉀溶液按 1:1 混勻，稱為混液 A。
4. 參考下表使用 1.5ml 離心管，設(shè)置空白對照管、標準品管和樣品管。如果樣品中鐵元
素含量過高，用裂解液適當稀釋后再進行測定。
5. 混勻，60℃ 孵育 1h。
6. 冷卻至室溫，將管蓋與管壁上液滴離心入管底。
7. 加入 30ul 鐵離子檢測劑，混勻，室溫孵育，30min。
8. 取 200ul 于 96 孔板，在 550nm 測定吸光度。如果不能測定 550nm，也可以在 540nm~580nm 范圍內(nèi)檢測。
9. 繪制標準曲線并計算鐵離子濃度。
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