| 大鼠褪黑素 (melatonin)elisa試劑盒 |
| 億迅億迅生物是一家專(zhuān)業(yè)elisa試劑盒供應(yīng)商,銷(xiāo)售各種進(jìn)口和國(guó)產(chǎn)品牌elisa試劑盒。對(duì)于elisa試劑盒,我們提供完善質(zhì)量保證,專(zhuān)業(yè)技術(shù)解答,耐心周到售后服務(wù),成為國(guó)內(nèi)多家科研機(jī)構(gòu)和高校試劑盒指定供應(yīng)商。 |
| 本試劑盒含量是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知待測(cè)物質(zhì)濃度標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將待測(cè)物質(zhì)和生物素標(biāo)記抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過(guò)HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色深淺和樣品中待測(cè)物質(zhì)濃度呈比例關(guān)系 |
| 大鼠褪黑素 (melatonin)ELISA試劑盒 |
| 試劑樣本收集和處理方法 |
| 在收集樣本前都必須有一個(gè)完整計(jì)劃，必須清楚要檢測(cè)成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)樣本，及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆�。�?duì)于隔天再檢測(cè)樣本，及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆茫袟l件，-70℃凍存?zhèn)溆�。�?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。 |
| 液體類(lèi)標(biāo)本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。 |
| 1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。 |
| 2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。 |
| 3.尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參? 照此實(shí)行。 |
| 4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。 |
| 5.培養(yǎng)細(xì)胞：檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。 |
| 6.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆�。�?biāo)本融化后仍然保持2-8℃溫度。加入一定量PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。 |
| 7.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融. |
| 8.不能檢測(cè)含NaN3樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶（HRP）活性。 |
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| 詳細(xì)操作步驟 |
| 1. 加樣：標(biāo)準(zhǔn)品設(shè)定5個(gè)濃度點(diǎn)10個(gè)孔，每個(gè)濃度設(shè)定平行孔，加入50微升不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品，空白孔設(shè)定1個(gè)孔加入50微升蒸餾水（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔，在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品*終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。 |
| 2. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 |
| 3. 配液：將30（48T20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T20倍）倍稀釋后備用。 |
| 4. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。 |
| 5. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。 |
| 6. 溫育：操作同3。 |
| 7. 洗滌：操作同5。 |
| 8. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. |
| 9. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。 |
| 10. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 |
| 試劑盒操作過(guò)程中有什么注意事項(xiàng) |
| 1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 |
| 2． 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。 |
| 3． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。 |
| 4． 請(qǐng)每次測(cè)定同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)*后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。 |
| 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 |
| 6． 底物請(qǐng)避光保存。 |
| 7． 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). |
| 8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 |
| 9． 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。 |
| 11. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。 |
| 計(jì)算方法 |
| 操作完成之后，詳細(xì)計(jì)算方式是：以標(biāo)準(zhǔn)物濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線直線回歸方程式，將樣品OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品實(shí)際濃度。 |
| 大鼠褪黑素 (melatonin)ELISA試劑盒 |
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