| 人中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)elisa試劑盒 |
| 億迅億迅生物是一家專業(yè)elisa試劑盒供應(yīng)商,銷售各種進口和國產(chǎn)品牌elisa試劑盒。對于elisa試劑盒,我們提供完善質(zhì)量保證,專業(yè)技術(shù)解答,耐心周到售后服務(wù),成為國內(nèi)多家科研機構(gòu)和高校試劑盒指定供應(yīng)商。 |
| 本試劑盒含量是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物質(zhì)濃度標準品、未知濃度樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將待測物質(zhì)和生物素標記抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色深淺和樣品中待測物質(zhì)濃度呈比例關(guān)系 |
| 人中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)ELISA試劑盒 |
| 試劑樣本收集和處理方法 |
| 在收集樣本前都必須有一個完整計劃，必須清楚要檢測成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天就進行檢測樣本，及時儲存在4℃?zhèn)溆�。對于隔天再檢測樣本，及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆茫袟l件，-70℃凍存?zhèn)溆�。標本�?yīng)避免反復凍融。 |
| 液體類標本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。 |
| 1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。 |
| 2.血漿：應(yīng)根據(jù)標本要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。 |
| 3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參? 照此實行。 |
| 4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。 |
| 5.培養(yǎng)細胞：檢測細胞內(nèi)成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。 |
| 6.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆�。標本融化后仍然保�?-8℃溫度。加入一定量PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑，用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。 |
| 7.標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復凍融. |
| 8.不能檢測含NaN3樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶（HRP）活性。 |
| 人中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)ELISA試劑盒 |
| 詳細操作步驟 |
| 1. 加樣：標準品設(shè)定5個濃度點10個孔，每個濃度設(shè)定平行孔，加入50微升不同濃度標準品，空白孔設(shè)定1個孔加入50微升蒸餾水（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔，在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品*終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 |
| 2. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 |
| 3. 配液：將30（48T20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T20倍）倍稀釋后備用。 |
| 4. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。 |
| 5. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 |
| 6. 溫育：操作同3。 |
| 7. 洗滌：操作同5。 |
| 8. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. |
| 9. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。 |
| 10. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。 |
| 試劑盒操作過程中有什么注意事項 |
| 1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 |
| 2． 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。 |
| 3． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。 |
| 4． 請每次測定同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請*后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。 |
| 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 |
| 6． 底物請避光保存。 |
| 7． 嚴格按照說明書操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準. |
| 8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 |
| 9． 本試劑不同批號組分不得混用。 |
| 11. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。 |
| 計算方法 |
| 操作完成之后，詳細計算方式是：以標準物濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品OD值由標準曲線查出相應(yīng)濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物濃度與OD值計算出標準曲線直線回歸方程式，將樣品OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品實際濃度。 |
| 人中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)ELISA試劑盒 |
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