掃描電鏡技術(shù)服務

一、服務介紹

     掃描電鏡是1965年發(fā)明較現(xiàn)代細胞生物學研究工具，它具有制樣簡單、放大倍數(shù)可調(diào)范圍寬、圖像分辨率高、景深大等特點。近年來，掃描電鏡已廣泛地應用在生物學、醫(yī)學、等學科領域中。

二、實驗原理

     主要是通過發(fā)射電子聚焦光束來掃描樣品表面形態(tài).電子束與樣品表面樣子發(fā)生作用,產(chǎn)生多種能夠被檢測信號,這些信號就包含了樣品表面形態(tài)和組成.染色。

三、實驗流程

1. 樣品初步處理

a.取材樣品面積可達8mm×8mm，厚度可達5mm。對于易卷曲樣品如血管、胃腸道粘膜等，可固定在濾紙或卡片紙上，以充分暴露待觀察組織表面。

b.樣品清洗

(1)用等滲生理鹽水或緩沖液清洗；

(2)用5%蘇打水清洗；

(3)用超聲震蕩或酶消化方法進行處理。

c. 固定

固定所用試劑和透射電鏡樣品制備相同，常用戊二醛及雙固定。由于樣品體積較大，固定時間應適當延長。也可用快速冷凍固定。

d. 脫水

樣品經(jīng)漂洗后用逐級增高濃度酒精或丙酮脫水，然后進入中間液，一般用醋酸異戊酯作中間液。

2. 樣品干燥

a.空氣干燥法

空氣干燥法又稱自然干燥法，就是將經(jīng)過脫水樣品，讓其暴露在空氣中使脫水劑逐漸揮發(fā)干燥。這種方法優(yōu)點是簡便易行和節(jié)省時間；它主要缺點是在干燥過程中，組織會由于脫水劑揮發(fā)時表面張力作用而產(chǎn)生收縮變形。因此，該方法一般只適用于表面較為堅硬樣品。
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b. 冷凍干燥法

(1)置于冷凍保護劑中：將樣品置于冷凍保護劑中浸泡數(shù)小時。常用冷凍保護劑為10%～20%二甲基亞砜水溶液，或15%～40%甘油水溶液。

(2)驟冷：將經(jīng)過保護劑處理樣品迅速投入用液氮預冷至(150℃氟利昂冷凍劑中，使樣品中水分很快凍結(jié)。

(3)干燥：將已凍結(jié)樣品移到冷凍干燥器內(nèi)已預冷樣品臺上，抽真空，經(jīng)幾小時或數(shù)天后，樣品即達到干燥。本方法不需要脫水，避免了有機溶劑對樣品成分抽提作用，不會使樣品收縮，也是較早使用方法。但是，由于花費時間長，消耗液氮多，容易產(chǎn)生冰晶損傷，因此未被廣泛應用。

3. 樣品導電處理(真空鍍膜法)

    真空鍍膜法是利用真空膜儀進行。其原理是在高真空狀態(tài)下把所要噴鍍金屬加熱，當加熱到熔點以上時，會蒸發(fā)成極細小顆粒噴射到樣品上，在樣品表面形成一層金屬膜，使樣品導電。噴鍍用金屬材料應選擇熔點低、化學性能穩(wěn)定、在高溫下和鎢不起作用以及有高二次電子產(chǎn)生率、膜本身沒有結(jié)構(gòu)�，F(xiàn)在一般選用金或金和碳。為了獲得細顆粒，有用鉑或用金-鈀、鉑-鈀合金。金屬膜厚度一般為10 nm～20 nm。真空鍍膜法所形成膜，金屬顆粒較粗，膜不夠均勻，操作較復雜并且費時，目前已經(jīng)較少使用。4. 拍攝

四、客戶提供

組織、細胞

五、提供

基本實驗步驟、藥品、樣品處理、圖片及圖片分析

實驗周期：3-4周

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